1 琼脂糖凝胶电泳配置_1.5%琼脂糖凝胶电泳
如果是核酸marker比较简单吧,就是看marker条带的大小和你的目标条带的关系,尽量选择目标条带接近分子量的marker,或是在目标分子量附近条带较多的marker.
另外就是,如果目标分子量很小,凝胶通常选择的浓度较大,就不能用分子量太大的marker,例如,只检测200bp的条带,那么用分子量最大到1000,或者500的marker就比较合适.
如果分子量很大,例如在几k,就可能会选择向lamda HindIII这样最大到23K的marker.否则凝胶浓度不合适,marker条带分不开,影响对你目标分子分子量的判断.
琼脂糖凝胶电泳条带的可见性取决于凝胶的染剂。使用紫外线(UV)激发的荧光染料(例如溴化乙锭)时,在 UV 灯下可以将条带观察为荧光带。在可见光范围内染色的染料(例如考马斯亮蓝)会在可见光下产生可见的蓝色条带。在显微镜或凝胶成像系统下观察条带,并根据它们的大小、移动距离和与已知标准的比较进行分析。
如果只是做鉴定,像PCR鉴定与酶切鉴定,可以将电压调大点,150左右就好;
如果是双酶切分离目标基因,为了让片段分开,就要相对的调小电压,70~80就好
电压80-150V都可以用,效果也都不错,其他电压不推荐,电压太高可能熔胶,电压太低跑太慢。
120V,越高跑的越快,但是跑出来的效果会差一些。我一般都是120V跑的,跑多久看你要分出来的带多大,条带之间大小差多少。